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À propos des tests MFIA M. hyopneumoniae et MFIA SRRP – M. hyopneumoniae

Comme vous le savez, la trousse ELISA M. hyopneumoniae d’Oxoïd/Dako ne sera plus disponible avant plusieurs mois. Parmi les

Comme vous le savez, la trousse ELISA M. hyopneumoniae d’Oxoïd/Dako ne sera plus disponible avant plusieurs mois. Parmi les options que nous vous proposons pour remplacer ce test, il y a le test MFIA M. hyopneumoniae et le test MFIA SRRP type 1 – SRRP type 2 – M. hyopneumoniae si vous voulez tester pour les anticorps SRRP en plus des anticorps M. hyopneumoniae.

MFIA est l’acronyme pour Multiplexed Fluorescing Immuno Assay. Les MFIA sont des immuno essais qui utilisent différentes sortes de microbilles (diamètre : 5 µm) chacune d’elles possédant un marquage fluorescent spécifique.

Les microbilles d’une sorte donnée sont recouvertes d’un antigène particulier. Ainsi, dans le cas du test MFIA SRRP type 1 – SRRP type 2- M. hyopneumoniae, on utilise 3 sortes de billes:

  • billes A recouvertes d’antigène SRRP type 1
  • billes B recouvertes d’antigène SRRP type 2
  • billes C recouvertes d’antigène M. hyopneumoniae

Les tests MFIA se déroulent de la manière suivante:

  • Étape 1 : les sérums à tester sont mis en présence du mélange des différentes billes dans les puits d’une microplaque. Pendant l’incubation (60 minutes à température pièce), les anticorps éventuellement présents se lient aux antigènes correspondants.
  • Étape 2 : les billes sont ensuite mises en présence d’anticorps anti-IgG porcines biotinylés. Pendant l’incubation (30 minutes à température pièce), les anticorps anti-IgG porcines biotinylés se lient aux anticorps IgG fixés à leurs antigènes correspondants.
  • Étape 3 : les billes sont finalement mises en présence de phycoérythrine (un fluorochrome) conjuguée à la streptavidine. Pendant l’incubation (30 minutes à température pièce), la streptavidine se lie à la biotine des anticorps anti-IgG porcines biotinylés.
  • Étape 4 : à l’issue de l’étape 3, les billes sont examinées au moyen d’un lecteur à fluorescence capable de différencier les différentes sortes de billes et, pour chacune d’elles (chaque antigène), déterminer l’intensité de la fluorescence générée par la phycoérythrine.

Entre chaque étape, les billes sont lavées à plusieurs reprises pour éliminer tous les éléments qui ne s’y sont pas fixés.

  • Étape 5 : l’ensemble des données sont finalement traitées par un logiciel qui, pour chaque sérum testé et chaque antigène inclus dans l’essai, compare l’intensité de la fluorescence à celles de sérums contrôles positif et négatif pour générer un indice S/P (i.e. intensité corrigée du sérum/ intensité corrigée du contrôle positif). Si la valeur S/P est supérieure ou égale à une valeur seuil, le sérum est considéré positif pour les anticorps correspondants; si elle est inférieure, il est considéré négatif.

Voyez des exemples de résultats pour les tests MFIA et l’évaluation des sensibilité et spécificité relatives des différents tests.

Voir les tableaux...

Vous pouvez télécharger les formulaires de demande d’analyses en format PDF interactif incluant ces tests MFIA.

Formulaires porcins

N’hésitez pas à contacter notre soutien technique pour des informations complémentaires.

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